■ងាយស្រួលដំណើរការ៖ ឧបករណ៍នេះត្រូវបានផ្គត់ផ្គង់ជា ២ ×បុព្វបទហើយ PCR អាចត្រូវបានអនុវត្តដោយគ្រាន់តែបន្ថែមពុម្ពនិងថ្នាំទ្រនាប់។
f ភាពស្មោះត្រង់ខ្ពស់៖ ភាពស្មោះត្រង់គឺខ្ពស់ជាងតាជប៉ូលីម៉េរ៉េស ៥០ ដង។
specific ភាពជាក់លាក់ខ្ពស់៖ ការចាប់ផ្តើមដំណើរការល្អប្រសើរដើម្បីធានាបាននូវភាពជាក់លាក់នៃផលិតផល។
ampl ការពង្រីករហ័ស៖ ល្បឿនបន្ថែមអាចឈានដល់ ១០-១៥ វិ/ខេ។
ext ការពង្រីកភាពខ្លាំង៖ បំណែកឌីអិនអេរហូតដល់ ២០ គីបអាចពង្រីកបាន។
■កម្មវិធីធំទូលាយ៖ ឧបករណ៍នេះមានផ្ទុកនូវ PCR Enhancer និងសមស្របសម្រាប់ការពង្រីក GC ខ្ពស់និងគំរូស្មុគស្មាញ។
ប្រភេទ៖ DNA Polymerase មានភាពស្មោះត្រង់ខ្ពស់
ល្បឿនពង្រីក៖ ១០-១៥ វិ/ខេ
ទំហំបំណែក៖ <២០ គីឡូបៃ
កម្មវិធី៖ ការពង្រីក PCR ដែលមានភាពស្មោះត្រង់ខ្ពស់, ការក្លូនហ្សែន, ការពង្រីកគំរូ GC ខ្ពស់, ការបង្កើតហ្សែនហ្សែនហ្សែនស្មុគស្មាញ, ការបង្កើនភាពស្មោះត្រង់ខ្ពស់ cDNA, ការរកឃើញ SNP, ការផ្លាស់ប្តូរទីតាំងជាក់លាក់។ ល។
ទិន្នផលស្រង់ចេញ DNA ពីជាលិការុក្ខជាតិផ្សេងៗ៖
ចំណាំ៖ ទិន្នផលឌីអិនអេអាស្រ័យលើប្រភេទគំរូ សមា្ភារៈទាំងអស់ខាងលើគឺមកពីស្លឹកឈើទន់។
ផលិតផលទាំងអស់អាចត្រូវបានប្តូរតាមបំណងសម្រាប់អូអឹមឌី/អូអេស។ សម្រាប់ព័ត៌មានលម្អិត,សូមចុចសេវាកម្មផ្ទាល់ខ្លួន (អឹមឌី/អូអឹម)
ការចាប់ផ្តើមក្តៅដើម្បីធានាភាពជាក់លាក់នៃផលិតផល រូបភាពទី ១. Ultra HiFi មានមុខងារចាប់ផ្តើមក្តៅល្អឥតខ្ចោះដើម្បីធានាបាននូវភាពជាក់លាក់នៃផលិតផលពង្រីក។ វិធីសាស្ត្រម៉ូលេគុលម៉ូលេគុលត្រូវបានអនុវត្ត (ម៉ា et al ។ , ជីវគីមីរន្ធគូថ, ២០០៦) ។ |
|
ភាពស្មោះត្រង់ល្អប្រសើរខ្ពស់ជាងតាកប៉ូលីមេរេស ៥០ ដង រូបភាពទី ២ ភាពស្មោះត្រង់របស់ Ultra HiFi គឺខ្ពស់ជាង ៥០ ដងនៃ Taq polymerase ធម្មតា។ ភាពស្មោះត្រង់នៃវត្ថុធាតុ polymerization នៃ Taq polymerase (ដោយគ្មានសកម្មភាពកែតម្រូវ) ត្រូវបានប្រើជាឯកសារយោង។ |
|
ការពង្រីកយ៉ាងឆាប់រហ័សនិងបំណែកវែងអាចត្រូវបានពង្រីកយ៉ាងឆាប់រហ័ស រូបទី ៣. Ultra HiFi អាចពង្រីករហូតដល់ ៥ វិ/គីឡូបៃសម្រាប់បំណែកតូចជាង ៤ ខេប ចំពោះបំណែកវែងៗពេលវេលាពង្រីកអាចពង្រីកបានសមរម្យ។ ចំពោះបំណែកដែលមានទំហំលើសពី ១៥ គីឡូបៃល្បឿនវិសាលភាពអាចឡើងដល់ ៣០ វិនាទី/គីឡូបៃ M: TIANGEN D15000 សញ្ញាសម្គាល់ |
|
ភាពជាសកលរឹងមាំនិងភាពជាក់លាក់ខ្ពស់ងាយស្រួលអាន GC ខ្ពស់និងបំណែកវែងៗពីប្រភពផ្សេងៗគ្នា រូបភាពទី ៤. Ultra HiFi មានភាពជាក់លាក់ខ្ពស់ដើម្បីធានាបាននូវអត្រាជោគជ័យនិងបរិមាណផលិតផលសម្រាប់ប្រភេទគំរូផ្សេងៗគ្នា។ A. លទ្ធផលនៃការពង្រីកអេកូហ្វាយហ្វាយ ខ-លទ្ធផលការពង្រីកអង់ស៊ីម Hi-Fi របស់អ្នកផ្គត់ផ្គង់ខេ លទ្ធផលលទ្ធផលការពង្រីកអង់ស៊ីម Hi-Fi របស់អ្នកផ្គត់ផ្គង់អិន M: TIANGEN D15000 សញ្ញាសម្គាល់ ផ្លូវ ១-៥ ។ លទ្ធផលពង្រីកពុម្ពដែលមានប្រវែងខុសៗគ្នា៖ ១. ៧៥០ ប៊ីភី; 2. 1 គីឡូបៃ; ៣ ។ 2 គីឡូបៃ; 4. 4 គីឡូបៃ; 5. ៦ ខេប ផ្លូវ ៦. លទ្ធផលនៃការពន្យាពេលគំរូ GC ខ្ពស់៖ ១៩១៥ ប៊ីភី (GC%៖ ៧០%); ផ្លូវលេខ ៧-១១ ។ លទ្ធផលនៃការពង្រីកគំរូ ២ គីបពីហ្សែនផ្សេងៗ៖ ៧. កណ្តុរ; ៨ ។ ស្រូវ; 9. ស្រូវសាលី; 10. ពោត; 11. បាក់តេរី; ផ្លូវលេខ ១២-១៤ ។ លទ្ធផលនៃការបែងចែកបំណែកវែង ៨ ខេបៈ ១២. អង្ករ; 13. ពោត; |
គំរូ A-1
template ពុម្ពមានផ្ទុកនូវសារធាតុមិនបរិសុទ្ធប្រូតេអ៊ីនឬតាឃ្យូអ៊ីនអ៊ីស្យូស។
■ភាពមិនត្រឹមត្រូវនៃពុម្ពគឺមិនពេញលេញទេ - បង្កើនសីតុណ្ហាភាព denaturation ត្រឹមត្រូវនិងពន្យារពេល denaturation ។
rad ការបំផ្លាញគំរូ —— រៀបចំគំរូឡើងវិញ។
A-2 Primer
quality គុណភាពអឹមមឺរ-សំយោគ primer ឡើងវិញ។
rad ការបំផ្លាញសារធាតុ Primer —— បញ្ជូលសារធាតុ primers ដែលមានកំហាប់ខ្ពស់ទៅជាបរិមាណតូចដើម្បីរក្សាទុក។ ជៀសវាងការកកនិងការរលាយច្រើនឬរយៈពេលយូរ ៤ អង្សាសេ។
design ការរចនាមិនត្រឹមត្រូវនៃ primers (ឧទាហរណ៍ប្រវែង primer មិនគ្រប់គ្រាន់, dimer បង្កើតឡើងរវាង primers ។
អេ-៣ មីលីក្រាម2+ការផ្តោតអារម្មណ៍
Mg2+ កំហាប់ទាបពេក - បង្កើនមីលីក្រាមត្រឹមត្រូវ2+ កំហាប់៖ បង្កើនប្រសិទ្ធភាពមីលីក្រាម2+ ការប្រមូលផ្តុំដោយប្រតិកម្មជាបន្តបន្ទាប់ពី ១ មីល្លីម៉ែត្រទៅ ៣ មីល្លីម៉ែត្រដោយមានចន្លោះពេល ០.៥ មីល្លីម៉ែត្រដើម្បីកំណត់មីល្លីមល្អបំផុត2+ ការផ្តោតអារម្មណ៍សម្រាប់គំរូនិង primer នីមួយៗ។
A-4 សីតុណ្ហភាពកំដៅ
temperature សីតុណ្ហាភាពចំហេះខ្ពស់ជះឥទ្ធិពលដល់ការចងទ្រនាប់ទ្រនាប់ទ្រនាប់និងពុម្ព។ - បន្ថយសីតុណ្ហភាពដុតនិងបង្កើនប្រសិទ្ធភាពលក្ខខណ្ឌដោយជម្រាល ២ អង្សាសេ
A-5 ពេលវេលាពន្យាពេល
extension រយៈពេលពន្យាពេលខ្លី - បង្កើនពេលវេលាបន្ថែម។
បាតុភូត៖ គំរូអវិជ្ជមានក៏បង្ហាញពីក្រុមតន្រ្តីលំដាប់គោលដៅផងដែរ។
ក -១ ការចម្លងរោគ PCR
■ឆ្លងកាត់ការចម្លងរោគនៃលំដាប់គោលដៅឬផលិតផលពង្រីក - ប្រយ័ត្នកុំដាក់បំពង់ដែលមានលំដាប់គោលដៅនៅក្នុងគំរូអវិជ្ជមានឬកំពប់វាចេញពីបំពង់ centrifuge ។ ទឹកថ្នាំឬឧបករណ៍គួរតែត្រូវបានស្វ័យប្រវត្តិដើម្បីកំចាត់អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ែរដែលមានស្រាប់ហើយអត្ថិភាពនៃការចម្លងរោគគួរតែត្រូវបានកំណត់តាមរយៈការពិសោធន៍ត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន។
ination ការចម្លងរោគនៃសារធាតុ - - កំចាត់សារធាតុគីមីហើយរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាពទាប។
A-2 នាយករដ្ឋមន្រ្តីr
Mg2+ កំហាប់ទាបពេក - បង្កើនមីលីក្រាមត្រឹមត្រូវ2+ កំហាប់៖ បង្កើនប្រសិទ្ធភាពមីលីក្រាម2+ ការប្រមូលផ្តុំដោយប្រតិកម្មជាបន្តបន្ទាប់ពី ១ មីល្លីម៉ែត្រទៅ ៣ មីល្លីម៉ែត្រដោយមានចន្លោះពេល ០.៥ មីល្លីម៉ែត្រដើម្បីកំណត់មីល្លីមល្អបំផុត2+ ការផ្តោតអារម្មណ៍សម្រាប់គំរូនិង primer នីមួយៗ។
design ការរចនាបឋមមិនត្រឹមត្រូវហើយលំដាប់គោលដៅមានភាពដូចគ្នាជាមួយនឹងលំដាប់មិនកំណត់គោលដៅ។ —- ការរចនាបឋមឡើងវិញ។
បាតុភូត៖ ក្រុមតន្រ្តីពង្រីក PCR មិនត្រូវគ្នានឹងទំហំរំពឹងទុកទាំងធំឬតូចឬពេលខ្លះទាំងក្រុមតន្រ្តីពង្រីកជាក់លាក់និងក្រុមតន្រ្តីពង្រីកដែលមិនជាក់លាក់។
អេ-១ មេ
■លក្ខណៈពិសេសបឋមខ្សោយ
—- ការរចនាបឋមឡើងវិញ។
concentration កំហាប់បឋមខ្ពស់ពេក - បង្កើនសីតុណ្ហាភាព denaturation ត្រឹមត្រូវនិងពន្យារពេល denaturation ។
ក -២ មីលីក្រាម2+ ការផ្តោតអារម្មណ៍
លោក Mg2+ កំហាប់ខ្ពស់ពេក - កាត់បន្ថយកំហាប់ Mg2+ ត្រឹមត្រូវ៖ បង្កើនប្រសិទ្ធភាព Mg2+ ការប្រមូលផ្តុំដោយប្រតិកម្មជាបន្តបន្ទាប់ពី ១ មីល្លីម៉ែត្រទៅ ៣ មីល្លីម៉ែត្រដោយមានចន្លោះពេល ០.៥ មីល្លីម៉ែត្រដើម្បីកំណត់មីល្លីមល្អបំផុត2+ ការផ្តោតអារម្មណ៍សម្រាប់គំរូនិង primer នីមួយៗ។
អេ -៣ ប៉ូលីមេរ៉េសដែលអាចធ្វើឱ្យកម្តៅបាន
amount បរិមាណអង់ស៊ីមលើស - កាត់បន្ថយចំនួនអង់ស៊ីមឱ្យបានត្រឹមត្រូវនៅចន្លោះពេល ០.៥ យូ។
A-4 សីតុណ្ហភាពកំដៅ
temperature សីតុណ្ហាភាពនៃការផ្សាភ្ជាប់ទាបពេក-បង្កើនសីតុណ្ហភាពដុតដោយត្រឹមត្រូវឬប្រើវិធីដុតពីរដំណាក់កាល
វដ្ត A-5 PCR
cy វដ្ត PCR ច្រើនពេក - កាត់បន្ថយចំនួនវដ្ត PCR ។
អេ-១ មេ—— ភាពជាក់លាក់មិនល្អ —— រចនាឡើងវិញនូវថ្នាំ primer ផ្លាស់ប្តូរទីតាំងនិងប្រវែងរបស់ primer ដើម្បីបង្កើនភាពជាក់លាក់របស់វា។ ឬអនុវត្ត PCR ដែលមានសំបុក
អេ -២ គំរូឌីអិនអេ
—— ពុម្ពមិនសុទ្ធ —— សម្អាតពុម្ពឬដកឌីអិនអេជាមួយឧបករណ៍បន្សុទ្ធ។
អេ-៣ មីលីក្រាម2+ ការផ្តោតអារម្មណ៍
- មីង2+ កំហាប់ខ្ពស់ពេក - កាត់បន្ថយមីលីក្រាមឱ្យបានត្រឹមត្រូវ2+ កំហាប់៖ បង្កើនប្រសិទ្ធភាពមីលីក្រាម2+ ការប្រមូលផ្តុំដោយប្រតិកម្មជាបន្តបន្ទាប់ពី ១ មីល្លីម៉ែត្រទៅ ៣ មីល្លីម៉ែត្រដោយមានចន្លោះពេល ០.៥ មីល្លីម៉ែត្រដើម្បីកំណត់មីល្លីមល្អបំផុត2+ ការផ្តោតអារម្មណ៍សម្រាប់គំរូនិង primer នីមួយៗ។
អេ -៤ ឌីអិនធីភី
—— កំហាប់ dNTPs ខ្ពស់ពេក —— កាត់បន្ថយកំហាប់ dNTP ឱ្យបានសមស្រប
A-5 សីតុណ្ហភាពកំដៅ
- - សីតុណ្ហាភាពនៃការដុតទាបពេក - បង្កើនសីតុណ្ហភាពដុតដោយត្រឹមត្រូវ
ក -៦ វដ្ត
—— វដ្តច្រើនពេក —— បង្កើនចំនួនវដ្ត
ជំហានដំបូងគឺត្រូវជ្រើសរើសប៉ូលីមេរ៉េសដែលសមស្រប។ តាម៉ីប៉ូលីមែរស្យុងធម្មតាមិនអាចពិនិត្យឡើងវិញបានទេដោយសារខ្វះសកម្មភាព ៣-៥ 'ហើយភាពមិនត្រូវគ្នានឹងកាត់បន្ថយប្រសិទ្ធភាពផ្នែកបន្ថែមយ៉ាងខ្លាំង។ ហេតុនេះហើយបានជាតាម៉ីប៉ូលីមែរស្យុងធម្មតាមិនអាចពង្រីកបំណែកគោលដៅធំជាង ៥ គីឡូបៃប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាពឡើយ។ Taq polymerase ជាមួយនឹងការកែប្រែពិសេសឬ polymerase ភាពស្មោះត្រង់ខ្ពស់ផ្សេងទៀតគួរតែត្រូវបានជ្រើសរើសដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពផ្នែកបន្ថែមនិងបំពេញតម្រូវការនៃការពង្រីកបំណែកវែង។ លើសពីនេះការពង្រីកបំណែកវែងៗក៏តម្រូវឱ្យមានការកែតម្រូវដែលត្រូវគ្នានៃការរចនាបឋមពេលវេលាកំណត់ពេលវេលាការពន្យារពេល pH បណ្តោះអាសន្ន។ ល។ ដើម្បីបងា្ករការបំផ្លាញគំរូពេលវេលានៃការបដិសេធនៅ ៩៤ អង្សាសេគួរតែត្រូវបានកាត់បន្ថយមកត្រឹម ៣០ វិនាទីឬតិចជាងនេះក្នុងមួយវដ្តហើយពេលវេលាដើម្បីបង្កើនសីតុណ្ហភាពដល់ ៩៤ អង្សាសេមុនពេលពង្រីកគួរតែតិចជាង ១ នាទី។ លើសពីនេះការកំណត់សីតុណ្ហភាពផ្នែកបន្ថែមនៅប្រហែល ៦៨ អង្សាសេនិងការរចនាពេលវេលាបន្ថែមយោងតាមអត្រា ១ គីប/នាទីអាចធានានូវការពង្រីកប្រសិទ្ធិភាពនៃបំណែកវែង។
អត្រាកំហុសនៃការពង្រីក PCR អាចត្រូវបានកាត់បន្ថយដោយប្រើឌីអិនអេប៉ូលីមែរជាច្រើនដែលមានភាពស្មោះត្រង់ខ្ពស់។ ក្នុងចំណោមតាមិលឌីអិនអេប៉ូលីមែរទាំងអស់ដែលបានរកឃើញរហូតមកដល់ពេលនេះអង់ស៊ីមភីហ្វូមានអត្រាកំហុសទាបបំផុតនិងភាពស្មោះត្រង់ខ្ពស់បំផុត (សូមមើលតារាងភ្ជាប់) ។ បន្ថែមពីលើការជ្រើសរើសអង់ហ្ស៊ីមអ្នកស្រាវជ្រាវអាចកាត់បន្ថយអត្រាផ្លាស់ប្តូរ PCR បន្ថែមដោយធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវលក្ខខណ្ឌប្រតិកម្មរួមទាំងការធ្វើឱ្យប្រសើរនូវសមាសភាពសតិបណ្ដោះអាសន្នការផ្តោតអារម្មណ៍នៃប៉ូលីមេរ៉េសដែលអាចទ្រាំទ្របាននិងបង្កើនចំនួនវដ្ត PCR ។
ចាប់តាំងពីការបង្កើតឡើងរោងចក្ររបស់យើងបាននិងកំពុងអភិវឌ្ products ផលិតផលលំដាប់ពិភពលោកដំបូងគេដោយប្រកាន់ខ្ជាប់នូវគោលការណ៍
ដែលមានគុណភាពជាចម្បង។ ផលិតផលរបស់យើងទទួលបានកេរ្តិ៍ឈ្មោះល្អនៅក្នុងឧស្សាហកម្មនិងមានទំនុកចិត្តក្នុងចំណោមអតិថិជនថ្មីនិងចាស់។